[桂花树价格]基于锌离子螯合能力及其抗氧化活性

　　以Zn2 螯合能力为评价指标，碱性蛋白酶在单因素实验中用于水解桂花，以及锌离子螯合肽的抗氧化能力。花。果表明，在pH 12条件下，Zn2 螯合能力最佳，底物浓度为10 mg / mL，酶添加量为2×105 U / mg，酶水解时间为3 h。水解温度为50℃，达到9.36mg / g。的抗氧化剂的试验结果表明自由基，羟基自由基，羟基自由基，二氯-1，1，1-二苯基-2-苦基苯肼（DPPH）（自由基2，2- azinobis-（ 3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）（ABTS ·）具有强大的捕集效果，而且与蛋白质浓度呈正相关。花三聚氰胺可被添加到食品中作为饮食基础开发高资源质量锌补充剂和在锌桂花三聚氰胺，蛋白质，酶水解富集功能食品;螯合剂锌离子的能力;抗氧化活性分类号:. TS202.3文献代码：的DOI：10.16693 / j.cnki。1671-9646从桂花醇溶蛋白蛋白水解产物，以提高znic和活动antioxydanteHAN嘉文，朱瑞芳* LI丹，杨静宇的螯合能力（X）的.2018.12.037Optimisation酶法制备杨超摘要：在本研究中，我们优化了酶促制备榉螯合肽的条件。碱性蛋白酶水解桂花醇溶蛋白，最佳条件为：pH值12，底物浓度10 mg / ml，酶添加量2×105 U / mg，持续时间在这些条件下，锌螯合能力为9.36mg / g。备的肽以浓度依赖性方式显示DPPH，羟基自由基和ABTS ·捕获活性。米醇溶蛋白可以作为开发的优质资源。Z补充剂和含锌强化的功能性食品。键词：桂花醇溶蛋白;水解; Zn2 螯合能力;抗氧化活性引言桂花含有大量的硫氨基酸和疏水性氨基酸。
　　内外研究表明，桂花蛋白肽具有低血压]，降血脂[2]，抗氧化[3]，抗疲劳[4]，加强免疫系统[5]，酒精毒性[ 6]等主动功能，从而引起了很多关注。（Zn）是人类和其他动物必需的微量营养素，其重要性与铁基营养素相当[7]。了增加微量营养素的摄入量，矿物质以盐的形式添加到强化食品中，这可能会改善微量营养素的缺乏[8]。而，该方法受许多问题的限制，例如低溶解度和氧化。此，作为螯合物添加到食物中可以增加矿物质的生物利用度。研究表明，特定的氨基酸（组氨酸，谷氨酸，天冬氨酸和半胱氨酸），以及膳食成分，如通过蛋白水解而获得的生物活性肽，与金属离子螯合之后有很大的提高。属离子（Zn或Fe）的生物利用度[9]。性蛋白酶被用于水解的蛋白质桂花和锌离子的螯合能力，使用作为评价指标，以优化酶水解的条件下，与酶水解产物为1，1-评价二苯基-2-trinitrophénylhydrazine（1，桂花树价格1-二苯基-2-苦基肼，DPPH）自由基，羟基自由基和ABTS 清除能力，为商业化生产，并进一步促进锌补充剂提供理论基础和富含锌的功能性食品。料与方法桂花材料与试剂（蛋白质含量86.41％），由上海麦克莱恩生化科技有限公司提供;碱性蛋白酶，由北京索莱宝科技有限公司提供;亮氨酸，Biosharp White Shark Biotechnology;十二烷基磺酸钠和氢氧化钠均为分析纯无水乙醇，六亚甲基四，硼酸，硼砂，磷酸二氢钾（所有分析级），辽宁Quanrui试剂有限公司供给的硫酸锌，乙二胺四乙酸（均为分析纯），由天津市河东区红岩试剂厂提供; OPA（98％），二甲苯的橙色指示剂，阿拉丁; β-巯基乙醇，南京森贝加生物科技有限公司提供1，1，1-二苯基-2-苦基苯肼（DPPH），2，2- diazide-（3-乙基 - 苯并）噻唑-6-磺酸二铵自由基盐（2，2-azinobis - （3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸盐），ABTS ·），合肥博美生物科技有限公司常州润华电气有限公司THZ-82A水浴恒温振荡器; SPECORD 210 Plus紫外 - 可见光自动光谱仪，德国耶拿分析仪器有限公司; pH计DELTA 320，梅特勒 - 托利多仪器有限公司的产品。
　　验方法酶水解优化实验选择底物质量浓度，酶添加量，酶水解温度和酶水解时间作为研究因素。物质量浓度设定为10，20，30，40，50，60 mg / mL，酶添加量设定为0.5×105，1×105，2×105， 8×105 14×105 20×105 U中的酶水解温度设定在40，45％，50％，55，60，65℃，酶水解时间1，2，3，4 ，5，6小时。个设计制作3个平行样本并取平均值进行计算和分析。α-苯二醛（OPA）（OPA）分光光度法测定游离氨基氮，测定该指数，计算奥斯曼醇的酶水解[10]。据式（1）计算酶水解程度。中：A-样品的质量浓度，mg / mL; hT-样品蛋白的肽键总数，7.80mmol / g。过Wang等人的方法测定锌离子的螯合能力。算方法略有修改。过用EDTA进行络合滴定测定螯合的锌含量。管20毫升锌螯合肽成锥形瓶中，加2滴二甲酚橙的（0.5％水溶液）和由六亚甲基四的盐酸缓冲液质量（的值加20％的pH）。5.0）一旦紫色稳定的溶液中加入4ml缓冲液，并用校准到0.001摩尔/ L，直到从黄色溶液变为深红和EDTA消费具有EDTA溶液滴定被录音了。据式（2）计算样品的Zn 2 螯合能力。中：AP - Zn2 沉淀物含量，mg，蛋白质含量P - 样品，g。氧化活性测试计算DPPH的自由基清除率。（2）测定捕获羟基自由基的效果。0.5ml水杨酸 - 乙醇溶液，0.5ml FeSO 4溶液，0.5ml样品溶液和1ml H 2 O 2溶液加入试管中。合后，在室温下反应10分钟，在510nm的波长下测定吸光度Al。0.5ml蒸馏水代替FeSO 4溶液，测定A2吸光度。0.5ml蒸馏水代替蛋白质溶液，测量空白吸光度A 0和VC作为阳性对照。
　　据式（4）计算羟基自由基的扫描速率。（3）确定ABTS 清除率。ABTS溶液的制备：将0.1g的ABTS· 和在100ml磷酸盐缓冲液0.029克过硫酸钾，混合并稀释至25℃，持续16个小时，然后取2毫升的反应溶液，并加18毫升。酸盐缓冲液，配制成ABTS ™储备溶液，储存在黑暗中以备将来使用。磷酸盐缓冲溶液稀释ABTS 储备溶液，测量波长734nm处的吸光度为约0.85，这对应于现在使用的ABTS 工作流体。定方法：分别取0.1 mL样品溶液，桂花树价格加入3.9 mL ABTS 工作液并混匀。混合物在室温下静置10分钟，在734nm波长下测量吸光度Al，通过用样品溶剂替换样品溶液测量空白吸光度A 0。过用磷酸盐缓冲液替换ABTS 工作溶液来测量吸光度A2，并且测试平行运行三次，VC。一个积极的检查。据公式（5）计算清除率ABTS 。1.3使用Excel 2007处理和绘制数据分析测试数据。用SPSS 22.0软件进行正交试验设计和显着性分析。果和讨论试验结果单因素的酶解时间上的螯合能力和效果桂花Zn2 的酶水解度为2毫克/毫升，该量的底物浓度酶添加量为1×10 5 U / mg，酶水解温度为50℃。pH 12下，选择不同的酶水解时间。水解时间对Zn2 桂花的螯合能力和水解度的影响如图2所示。1.可从图1可以看出，螯合能力与Zn2 的增加与前酶促水解时间3小时，用Zn2 的螯合能力达到5.12毫克/克至3小时，在2和4小时显着高于Zn2 螯合作用。量，因此最佳反应时间为3小时。
　　不同的酶水解时间下测量酶水解产物的酶水解程度。水解程度先增加后减少。pH 12下观察到底物浓度对桂花Zn2 的螯合能力和酶水解程度的影响，酶添加量为1×105U / mg，酶水解温度为50℃。醇溶蛋白Zn2 螯合能力和酶水解程度的影响。物的质量浓度对Zn2 桂花的螯合能力和酶水解程度的影响示于图2中。2.在图2中可以看出，在6至10mg / ml的底物浓度下，奥斯曼醇和Zn2 的螯合能力逐渐增加。底物浓度为10mg / ml时，Zn 2 的螯合能力为5.92mg / g，达到最高，此时酶水解度为36.13％。着底物质量浓度的增加，桂花Zn2 的螯合能力和酶水解程度缓慢下降，可能是因为反应体系的粘度由于增加而增加。物的质量浓度，反过来影响分子位移的速率和减少。Zn2 螯合能力与底物和酶促切割位点结合。2mg / mL时，酶水解的温度50的衬底浓度下观察到对螯合能力和桂花Zn2 的酶水解的程度酶添加效果℃，pH为12，酶水解时间为5小时。胶蛋白Zn2 螯合能力和天竺葵酶水解程度的影响。加酶对Zn2 桂花的螯合能力和酶水解程度的影响示于图2中。

　　3.可从图3可以看出，桂花和Zn2 先增大后的螯合能力随酶添加当酶的加入量是降低2×105U / mg，Zn2 的螯合能力为9.36mg。时酶水解程度最高，为15.55％。后，随着加入酶，酶水解的程度逐渐增加，而锌离子的螯合能力呈下降趋势，其可以通过水解度引起太重要了，破坏了Zn2 和蛋白质的结合位点。水解温度对桂花三聚氰胺Zn2 的螯合能力和酶水解程度的影响为2 mg / mL底物浓度，2 x 105 U / mg酶， pH 12和水解时间为5小时。究了酶水解温度对Zn2 桂花螯合能力和酶水解程度的影响。水解温度对桂花的蛋白水解分辨率和Zn2 螯合能力的影响如图2所示。
　　4.从图4可以看出，桂花螯合能力和Zn2 先增大后随水解温度降低enzymatique.Lorsque酶解温度为50° C，桂花和Zn2 的螯合能力为9.36mg。/ mL，达到最大值，此时酶水解度为15.55％。着酶水解温度的持续升高，Zn2 螯合能力逐渐降低，而酶水解程度继续增加。酶水解温度达到60℃时，酶水解程度达到26.09％然后降低。结果表明，香叶醇和Zn2 螯合能力与酶水解程度之间没有正相关。据上述单因子结果，在反应体系pH 12的条件下，底物的质量浓度为10mg / ml，酶添加量为2×10 5 U / mg，酶水解时间为180 min，酶水解温度为50°C，osmanthol与Zn2 的最佳螯合能力为9.36 mg / g。最佳条件下，桂花锌离子螯合物（ZA）通过桂花蛋白酶碱性消化制备。麦谷蛋白和桂花自由基桂花和DPPH的其螯合锌离子的清除活性的锌离子螯合物的抗氧化能力在图中示出。5.从图5中可以看出，随着ZA质量浓度的增加，DPPH清除率显着增加。浓度为8毫克/毫升，消除牡丹醇溶蛋白DPPH自由基为52％和锌离子螯合物桂花的去除率DPPH自由基76的速率％，显着高于未反应的桂花醇。氨酸（p <0.05）。

　　基自由基是极其有害的氧自由基，可以与体内的蛋白质和其他物质发生反应，破坏它们的活性。花及其锌离子螯合物的羟自由基清除活性如图1所示。6.如图6所示，随着蛋白质浓度的增加，ZA和未反应的桂花捕获羟基自由基的能力增加。浓度为6 mg / mL时，桂花三聚氰胺的羟自由基清除率为36％，ZA的透明羟基含量为71％，远远高于反应前的桂花（p <0.05）。ABTS ·被广泛用于测定样品的抗氧化能力，蛋白质样品与自由基ABTS反应使其褪色。光度越低，样品的抗氧化能力越强。7显示了桂花及其锌离子螯合物的ABTS 捕获活性。7显示随着蛋白质浓度的增加，ABTS 的桂花和ZA消除速率增加。浓度为6毫克/毫升，桂花后ABTS 为36％的清除率和ZA与ABTS 清除率是58％，表明ZA的清除率很优秀。之，相对于所述桂花三聚氰胺，天竺葵糖蛋白具有与碱性蛋白酶酶促水解后不同程度的DPPH自由基，羟基自由基，澄清容量ABTS 的。论以螯合锌离子的能力被用作指标通过测试反应体系unique.Le因子为12的pH值来确定所述蛋白酶桂花碱性水解的最佳条件下，底物浓度是10毫克/毫升和加入酶的为2×105单位/毫克，酶促水解时间为180分钟时，酶水解温度为50℃和的螯合能力桂花和Zn2 效果最好，达到9.36 mg / g。离子螯合锌麦醇溶蛋白天竺葵，在最佳条件下通过酶水解得到的，含有自由基，羟基自由基和诱捕能力ABPH比未处理桂花显著更高。好的抗氧化能力，为桂花的后续处理提供参考。
　　本文转载自
　　桂花树价格 https://www.guihua1998.com