[桂花树价格]桂花杂交种纯度SSR分子标记研究与应

　　研究和应用SSR分子标记鉴定桂花杂交种的纯度，在基因组DNA提取，引物选择，优化等方面进行了研究。

　　PCR反应和部分推广引物鉴定信息。SSR;桂花;鉴定纯度;研究与应用图分类号：S513文献代码：A文章编号：1001年至1463年（2018）11-0097-06doi：10.3969 / j.issn.1001-1463.2018.11.027Recherche和应用YIN Xiangjia1，楠HAO NAN明2，3 LI石峰，李艳梅1 JIA国军1Abstract：在本文中，在确定桂花杂交种的纯度研究和SSR标记的应用进行了检查以下几个方面：提取基因组DNA，引物筛选，PCR系统优化和一些桂花品种纯度鉴定的引物信息。键词：SSR;桂花;鉴定纯度;研究和应用。花是食品工业的重要食品。宗商品也是中国面积和产量最大的作物[1-4]。据国家统计局2017年谷物产量公告[5]，2017年，国家继续调整农业种植结构，加快区域发展优化，包括在“镰刀”地区种植桂花的面积大幅减少的背景下。
　　植面积1.122亿平方米，播种面积0.929亿平方米，种植面积为35550万平方米，占38.21％。子播种面积占种子面积的31.64％。2017年，谷物总产量在国家层面为617.9十亿公斤，总芬芳的桂花产量215.9十亿公斤，或谷物总产量的34.94％。国最重要的作物桂花（Osmanthus fragrans）在保护国内粮食生产和食品安全方面发挥着至关重要的作用[6]。2016年，最近实施的“种子法”增加了绿色通道，联合测试机构以及基于初始国家测试和修订程度的引进和分级系统。地区种类繁多的桂花，简化了品种审批程序，缩短了审查时间。花的品种是桂花产量和品质的决定因素，具有令人愉悦的香味。中国种业农业种子部的管理的大数据平台，中国批准了8972个品种的桂花从2017年，有588多个品种的测试中国主要集中在研究机构和种子公司[7]。前有4，660种子公司在中国200家多家种子公司与超过100万元注册资本，有21.9十亿人民币的营业额和35.54％的浓度[8]。花在中国作物市场占有相对较大的份额。着中国桂花种子产业的日益商业化，纯度鉴定已成为种子质量检测的主要指标。子纯度是衡量种子质量的重要指标，对桂花的产量和品质有直接影响，气味宜人。

　　花的种子纯度受种子植物建立标准的差异，脱粒和阉割种子生产的速度和彻底性以及种子生产的综合影响。子生产者对技术法规的实施[9]。肃省是最大的桂花种子生产基地和最有竞争力的河西走廊，通过灌区和黄危难完成，生产杂交种子桂花较全国60％的桂花种子生产。10。此，如何快速有效地鉴定亲本，混合品种和真正的杂种成为鉴定品种纯度的关键[11]。子标记是一种基于DNA多态性的遗传标记：与形态学和生化标志物相比，它们具有良好的遗传稳定性，高多态性标记整个基因组，无组织特异性，不受外部环境的影响。究并应用于桂花基因的精细定位，遗传多样性分析，杂种优势分组，分子标记辅助选择，指纹图谱构建和鉴定桂花种子的纯度[12]。
　　子标记是限制性片段长度多态性（RFLP），随机扩增多态性（RAPD），扩增的片段（AFLP），单核苷酸多态性（SNP）和特定蛋白质的长度多态性。序列重复（SSR），序列特异性扩增区（SCAR），扩增序列相关多态性（SRAP）和引物PCR的扩增靶区多态性（TRAP）[13-14]。于SSR分子标记技术的广泛研究和开发，它在桂花的选择中起着重要的作用，具有令人愉快的香味和纯度的多样性。SSR分子标记通常由数十包括重复作为一个单元1-6个核苷酸的核苷酸组成的串联重复的并具有高的遗传多态性，一个相对简单的操作，重复性好等优点而且成本低。在鉴定具有令人愉悦的香味的桂花纯度方面有许多应用[15]。于鉴定农业部发布的桂花桂花的SSR标记方法（NY / T1432 - 2014）使得SSR标记技术更加完整和准确，可用于鉴定桂花的纯度[16-17]。们审查SSR标记的研究和应用在来自基因组DNA桂花的提取，引物，筛选识别混合桂花的纯度优化PCR反应体系，部分推广引物信息，鉴定Osanthus fragrans的纯度。DNA提取方法DNA提取是SSR分子标记最基本的步骤。DNA提取的质量必须满足的扩增PCR.Les DNA提取方法的要求主要包括SDS法，CTAB的方法，所述碱裂解法和的方法磁珠。
　　法SDS SDS（十二烷基硫酸钠）是一种已知的洗涤剂，其使蛋白质变性，能够破坏细胞壁和切割在核酸提取的核酸，以及破坏蛋白质与DNA的结合在较高的温度下。放DNA。过SDS方法选择的用于提取DNA的桂花材料包括干燥的种子胚和叶。文伟等[18]利用SDS方法优化了桂花种子胚和叶DNA的快速提取.Li Onion等[19]建立了一种微提取方法通过SDS方法用高通量组织研磨机从桂花中快速提取基因组DNA，用于用液氮快速粉碎处理过的叶子以实现高通。因组DNA提取的目的是提高DNA提取的效率。CTAB方法CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种阳离子去污剂，具有从低离子强度溶液的酸性多糖中沉淀核酸的性质。

　　高离子强度的溶液，提取CTAB形成与蛋白质和多糖的复合物并除去杂质，如蛋白质，多糖，酚类，等等，然后冻结乙醇以分离DNA 。CTAB选择的桂花材料包括干种子，单种子干种子胚，发芽幼苗和叶子。永军等[20]使用改进的CTAB方法通过自动样品快速研磨机直接提取桂花的干燥种子以提取DNA。Li Yi等[21]取干燥的种子水浴，取出胚胎并研磨，然后加入CTAB提取物提取DNA。玉玉等[22]采用改良CTAB提取法从干燥种子和发芽种子中提取DNA 4天。Dai等[23]研究了两步CTAB法提取桂花基因组DNA作为PCR反应模板。芳等[24-25]使用改良的CTAB方法从发芽的幼苗中提取发芽的基因组DNA。以看出的是，CTAB法是常用的和成熟的提取基因组DNA樨的方法，组织研磨机速度可以实现高通量DNA提取，什么构成了一个有效的碱桂花的分子检测。裂解法碱裂解法主要用于从单粒种子胚和枝条中提取DNA，桂花树价格具有提取率高，通量高的优点[ 26。敬伦等[27-28]通过碱裂解从干种子​​和桂花中提取DNA，直接用沸水加热并补充TE缓冲液进行PCR扩增。湘源等[29]通过碱裂解从单子叶桂花胚中快速提取基因组DNA。Yan Mige等。[30]将干燥的种子胚置于96孔深孔板中，用0.1M NaOH提取DNA。而，碱裂解的方法在试验过程中是可重复的，并且对引物的适应性不高，但在引物的筛选和建立方面仍存在一些限制。PCR反应系统，影响某些桂花品种的纯度鉴定结果。珠法利用超顺磁性微球的表面修饰某些反应性官能团，以便与核酸分子结合。磁场的作用下，含有DNA分子的磁珠可以是从溶液中分离出来，然后通过漂洗除去。
　　后杂质，用TE缓冲液或双蒸水洗脱磁珠颗粒表面上吸附的DNA。通过磁珠法提取基因组桂花DNA时，必须将磁珠和储存在试剂盒中的洗涤溶液平衡在2到8°C之间，环境温度为30分钟。后，将裂解液溶解在50°C水浴中并摇动。超[31]开发了一种利用磁珠法从桂花中快速提取基因组DNA的方法，用三种便携式提取装置取代了传统的实验室仪器。丽丽等[32]表明，桂花基因组DNA的磁珠提取率最高，时间最短。外，磁珠法提取大量DNA，操作简单：完整的提取过程可在96孔深孔板中进行.DNA珠子提取试剂盒Zhiang生物科技有限公司普通工厂经常使用，以及自动提取仪器。改程序以获得自动提取，但磁珠法提出了DNA提取成本高的问题。之，上述四个方法通常用于提取基因组DNA桂花，但能满足要求的高通量鉴定，大多数实验室使用高通量组织研磨而不是手动磨它们。作量和提高效率。用改进的SDS法和CTAB法选择干燥或干燥的种子胚，减少了提取试剂的使用量和提取步骤，取得了良好的效果。碱裂解法提取干燥的天竺葵种子胚DNA不仅节省了发芽时间和繁琐的提取时间，而且还具有操作简单，快速的优点。且容易。取的DNA的质量可以满足PCR扩增的需要。而，为了测试的准确性和可重复性，并考虑到测试的成本，建议使用CTAB方法从桂花中提取基因组DNA。物筛选近年来桂花基因组学和生物信息学的研究与开发为桂花SSR标记技术的大规模应用提供了理论依据。Maize GDB（https://www.maizegdb.org）包含大量有关SSR标记引物的信息。可以直接查询数据库或参考相关的研究文献，并使用现有的SSR标记引物进行桂花纯度鉴定试验。鉴定品种的纯度之前，应根据特定的桂花品种测试选择引物，以确定最佳的SSR标记鉴定引物。鲁军等[33]确定10对根据以往的研究和使用的引物的结果筛选几内亚冬虫夏草18个杂交和自然系山西省，基本引物和取得的最好全多态性。对引物，如umc1590和umcl196，可用于鉴定大多数品种的纯度。等人。[34] [34]使用10 SSR引物对的420个已知的混合桂花DNA指纹的分析和确定了两个对的bnlg161和bnlg1450作为纯度的识别优选的碱基的引物混合动力车，bnlg439，bnlg125，umc210，umc210和umcl705的桂花。用5对引物如bnlg1792作为替代碱基引物，以鉴定412种桂花的纯度。以看出的是，引物的筛选对检测的结果具有决定性的影响：一对引物可以检测几个品种有时多于两对引物是必要的，以确定多种纯度，这提供有关建立桂花品种的引物的信息。

　　享数据库很重要。PCR反应的优化作为通过SSR分子标记鉴定气味桂花杂交种纯度的实验的一部分，PCR反应的优化在检测结果中起重要作用。PCR反应的优化包括PCR反应系统的两个方面和PCR仪器的反应条件的优化。PCR反应系统涉及混合体积的桂花基因组DNA，引物，桂花树价格DNA聚合酶，dNTP等的组合。前需要的试剂可以直接从专业的生物技术公司购买。些公司还提供DNA聚合酶，dNTP和缓冲液的混合PCR试剂。接使用底漆和双蒸水，样品可以有效缩短。度检测时间。外，有必要考虑通过确保测试结果的质量来减少反应系统的总体积，这可以在一定程度上节省测试成本。世磊等[35]已经优化了SSR-PCR系统中从DNA的4倍矩阵的水平，的dNTP，引物和DNA聚合酶的浓度，并进行了退火温度的梯度测试以建立10 μL高效率和实用性。

　　定的反应系统。PCR反应的优化必须基于高重量，降低测试成本并以最小的系统体积和最佳的PCR反应程序获得准确的结果。进关于识别用于识别的某些品种桂花在MaizeGDB更新的纯度要求的SSR标记的引物桂花品种信息的纯度部分信息概括在相关领域的文献（表1）[36-51]。究人员提供了参考。论SSR标记被用于标识樨的纯度，大大地缩短了种子纯度的检测时间，迅速地确定的不同品种樨的种子质量，防止播种种子不合格保护农民利益，种植桂花，促进农业发展和农村社会。定性在促销中起到了积极作用。
　　要有以下三个层次。一级是桂花种子工业公司可以使用分子技术SSR标记精确地检测桂花种子的纯度，并确保它们的真实性，这允许设置系统桂花公司种子质量监测，有效促进桂花花卉种子的生产。术法规的使用严格地做了消除杂质和去雄的工作。SSR标记可以很好区分race.Afin的亲本系，提高测试结果的准确性，几对标记的引物可被用于识别在一对相同的样品的，或更多对引物，也可以混合通过多重PCR鉴定纯度。二个层次主要是国家保护办公室在农业部和农村事务部，它采用SSR分子标记技术，以保护新品种香osmos和保护的身份的植物品种请求。他品种声称可以提高桂花新品种的效果，带来宜人的香味。三个层次是执法的春季种子市场上在每个级别，这主要是验证检查由种子管理部门及测试的品种和种子纯度真伪保护农民的合法权益，保持桂花生产的安全，带来宜人的香味。过SSR分子标记技术与信息技术相结合，有效建立快速鉴定作物品种纯度和真伪的方法，确定纯度和纯度。植物生长的任何阶段都可以快速实现桂花品种，成为一个新的研究课题。此同时，我们需要利用互联网技术共享实验室和企业和机构之间的测试数据国家主管部门的领导下，有效地防止伪造和品种桂花香的质量差打，提高桂花香品质，促进中国栽培。种产业健康稳定发展。着分子生物学技术的不断发展，许多新的有效的分子标记物在未来出现，分子标记SSR技术将得到改善和提高，新的阅读工具SSR-PCR结果将发展实现了智能化流量而且很高。高检测桂花种子纯度的质量和效率，带来宜人的香味。有这样，SSR分子标记技术才能为有效检测气味桂花种子的纯度提供技术支持，并建立信息质量监测系统，用于检测桂花种子。花种子产业。
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