通过RT-PCR扩增获得绿色黄瓜花叶病毒（CGMMV）山东泰安南瓜分离株（CGMMV-TANG）包膜蛋白基因。过序列分析，分离出包膜蛋白（CP）。基因的长度为486个核苷酸，由161个氨基酸组成。较CP基因的核苷酸序列的同源性，并构建系统发育树。过结合宿主和地理来源进行分析，结果表明不同的病毒分离株与地理区域具有一定的关系。花绿斑花叶病毒（CGMMV）是Tobamouirus属的成员，最早由Ainsworth报道。
主要分布在欧洲和亚洲国家和地区，例如日本，印度和英国，并且是许多国家和地区的重要隔离病毒之一，严重威胁诸如西瓜，甜瓜和桂花等葫芦的生产，通常使产量减少约15％。年来，在中国不同地区发现了这种病，这是一种潜在的危险害虫。厦门检验检疫局于2004年首次拦截进口的日本木瓜种子的CGMMV以来，已在河北，甘肃，北京，辽宁等地区相继发生。
2005年，辽宁省盖州市仅CMVMV感染的西瓜面积仅为333 hm2。中，必须收获13hm2。此，农业部发布了第788号公告，将其确定为农业植物检疫的国家机构。此，加强知识，发现和对抗病毒流行特别重要。研究采用RT-PCR方法检测山东泰安南瓜样品中的CGM-MV病毒，并比较了其包膜蛋白（CP）基因的序列，分析。山东泰安田收集了感染了CMGMV的南瓜病菌株。Transzol，M-MLV，RNase抑制剂和TaqE由北京全世进公司提供； pMD18-T克隆载体和核酸内切酶购自TaKaRa公司。Transzol方法用于直接从患病叶片中提取总RNA作为模板，并使用来自CGMMV的G1-3：5-TGGGC-CCCTACCCGGGAAAAAG-3引物进行逆转录。5末端引物C1-5：5-ATGGCTrACAATCCGATCAC-3和配对的引物G1-3用于PCR扩增。使用的程序为：94℃3分钟； 94°C 55s，55°C 55s，72°C 1min，30个循环; 72 10°C回收PCR产物后，将其与pMD18-T连接，然后转化到大肠杆菌DH5a中，纯化质粒，并通过PCR和酶切鉴定。重组质粒发送至上海博雅股份有限公司。行测序。在GenBank中获得的序列进行BLAST搜索；使用DNAMAN和DNAstar等软件分析核苷酸和氨基酸序列，使用MEGA4.1构建系统发育树。
过琼脂糖凝胶电泳检测通过RT-PCR扩增的产物，获得约700bp的片段（图1）。序结果表明，南瓜上的分离物为CMGMV。增产物的序列分析表明，获得的目标片段的长度与预期结果一致，为667 bp，包含完整的CP基因，共486个核苷酸，编码161个氨基酸（图2）。以及其他CGMMV报道的分离株相同，命名为CGMMV-TANG（GenBank访问号：GQ500898）。苷酸同源性比较表明，与辽宁西瓜分离株（EF611826）的核苷酸同源性最高，达到99.6％，与西班牙桂花分离株的同源性最高。（GQ411361）最低，为91.6％。
GenBank上不同区域的不同宿主中共选择了21种CGMMV和CGMMV-TANG分离株。较这些分离物的CP基因的核苷酸序列的同源性，并且核苷酸序列彼此非常相似。均同源性是96.9％。
CGMMV-TANG与其他分离株的同源性为91.6％至99.6％，氨基酸的同源性为98.5％至100％。用AB162006（Kyuri Green斑驳病毒，KGMMV）作为外部组，对这21个分离株的CP基因核苷酸序列的系统树分析（图3）显示，KGMMV和CMGMV分离株是独立的de分支和CGMMV分离株可分为与进化I和II相关的两组。一组主要包括来自中国大陆，台湾，日本，韩国，法国和希腊的15种分离株，CMGMV-TANG位于第1组。过比较发现第一组分离株的同源性核苷酸序列同源性。源是从97.3％至99.6％，
桂花树价格第一组和第二组之间的同源性是从90.6％至92.6％。Ⅱ组包括来自希腊，西班牙和俄罗斯的6种欧洲分离株，同源性在95.7％和100％之间。花绿色花叶病毒是危害葫芦科植物的重要病毒之一，自2004年以来不断报道其危害。005年，广西农业科学院从桂花中分离出CGMMV。西农业展览中心的观赏南瓜叶；陈宏运等人于2006年在辽宁西瓜中检出CGM-MV。红霞等人于2007年在甘肃南瓜果实中检测到CGMMV。2009年; 2009年田永磊等人在北京甜瓜和山东西瓜中检测到CGMMV。这项研究中，该病毒首先是从山东田间的南瓜中分离出来的，并在核苷酸序列CP的水平上分析了不同菌株与宿主和区域来源之间的关系。该序列构建的系统进化树表明，CMGMV分离株可分为两类：第一组，法国分离株（AJ429090）和希腊分离株（AJ459423）为亚洲分离株，而第二组是欧洲分离株，表明不同CGMMV分离株的基因组变异具有一定的区域相关性，这与张永江等报道的结果不一致。（2008年），但不同菌株的基因组变异与宿主物种无关。系统发育树中可以看出，I和Ⅱ组可以分为三个不同的亚组。
CGMMV-TANG位于I亚组。列比对显示，同源性最高的分离株是中国辽宁（EF611826），为99.6％；其次是韩国分离株（AF417243）和日本分离株（D12505），占99.4％，表明日本和韩国报告的CGMMV-TANG和CGMMV具有共同的流行来源感染，进一步证实了中国的CGMMV可以从国外引入和传播。Ⅱ组三个亚群的分离株来自希腊，西班牙和俄罗斯等欧洲国家，这进一步解释了为什么它们在该地区具有一定的相关性。前，关于中国遗传CMGMV的起源和进化的研究很少，比较整个CMGMV基因组核苷酸序列的同源性可以更好地确定其遗传结构。CGMMV基因组因区域不同而发生了变化。
要其他研究。
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