桂花B族核型的鉴定与分析

　　以四川，云南，贵州，重庆桂花等50个地方品种为试材，采用根尖染色体压缩技术分析了核型的主要参数。花局部品种B染色体的形态特征结果显示，桂花的50个本地变种中有16个具有B染色体，占被测材料的32％。50个分裂相中，有50×30×5（指50个变种，每个包含30个胶片，每个胶片包含5个镜子），其中185个细胞包含B染色体，占观察到的细胞总数的2.47％ 。花的B染色体比常染色体短，平均长度为2.56μm。型分析结果表明，没有B染色体和B染色体的桂花1〜10号染色体的相对长度分别为14％，12％，11％，11％，10％，9％，9。％和8％。8％，7％。t检验是对没有桂花B和染色体B的桂花品种的十对染色体的相对长度进行的。试结果不显着，表明不存在B染色体。
　　常染色体核型有显着影响。物种的染色体分为A染色体和B染色体。条染色体是正常核型范围内的一条染色体。B染色体多于细胞中的染色体数。前，已经在大约1800种动植物中发现了B染色体[1]。常认为B染色体具有以下特征：结构，形态和数量上的多态性。具有与A染色体相同的染色体和着丝粒臂。分为末端着丝粒染色体，中央着丝粒染色体和其他。丝粒中间染色体的类型，B染色体的数目在不同物种之间差异很大，有时同一物种的不同个体之间也存在差异[2]；从形态上讲，B染色体通常小于A染色体上的最小染色体，但也有例外[3]。
　　多数具有异染色质特性，但也有例外[4]；尽管有斑点，但数目并不稳定[5]； B染色体不同于同一细胞中的任何A染色体，在减数分裂中，配对只能发生在B染色体之间[6]。B染色体包含许多高度重复的序列，并具有与A染色体同源的转座因子和基因序列[7-8]。于其特殊的地理和气候条件，中国西南地区的当地农民总是种植当地的桂花品种。对西南桂花品种的本地资源进行收集，整理和研究时，我发现B染色体出现在西南桂花品种的本地资源中。花品种是研究B染色体的理想且独特的材料[9]。此，将中国西南地区的桂花品种作为试验材料。用根尖压缩技术进行染色体的染色体鉴定。较了有和没有B染色体的本地桂花品种的主要核型参数。些差异将为分析桂花B染色体的遗传机制奠定基础。桂花的50个地方品种为材料，表1给出了材料的数量，来源和特性。
　　验材料由长江师范大学桂花育种研究组提供。花种子在室温下浸泡2 h，放入25℃的河沙中进行恒温培养，当胚芽长达到1.0到1.5时厘米，从上午9:00到上午10:00取材料并切成0.5到1.0厘米。根尖放在饱和的α-溴萘溶液中，并在4℃下预处理3.5小时。净预处理过的根尖，将其置于Carnot固定液中（乙醇与冰醋酸的体积比为3：1），并在4°C下固定24 h。蒸馏水浸泡固定材料30分钟，然后切开根尖的透明部分，仅留下乳白色的分生组织，然后将其放入0.2 ml PCR试管中。
　　4到6个根尖放在PCR试管中，加入40μL2.5％纤维素酶-果胶酶混合溶液，在35 35消化4至5小时；将消化后的根尖放在载玻片上，加入Carbopol染色剂溶液，并用解剖针包装根尖，压碎并盖上压缩条。实验于2014年9月至2016年12月在长江师范大学桂花研究小组的实验室中进行。于每个当地桂花品种，均装载了30个桂花品种，并选择了5个清晰的分离阶段每条染色体，并计算了染色体数，以确定B染色体是否存在。
　　果细胞中的染色体数超过20，则表明存在B染色体，就形态而言，B染色体小于最小的A染色体，并且高度异色[9]。B染色体和非B染色体的材料进行分类，分析两种材料的核型，分析桂花局部品种B染色体的分布和形态特征，比较有和没有染色体的桂花核型的差异。B使用DPS软件对染色体的相对长度进行t检验。50个桂花本地品种中，有16个桂花本地品种具有B染色体（表2和图1），占被测材料的32％，并且34个桂花本地品种没有染色体。B（图2显示4不包含B染色体）。花本地品种的染色体B），占测试材料的68％。50×30×5的镜像中（参考50个变体，每个变体30个，定义每个图像5个），发现185个包含B染色体的图像，占2.47％。察到的细胞总数。DP7，DP76和DP77材料中B染色体的频率分别为23.33％，20.00％和16.67％。生频率很高。他带有B染色体的桂花中B染色体的频率在3.33％至6.67％之间。间。B染色体的细胞从0变为2。含0、1、2个B染色体的细胞数量分别占细胞总数的97.50％，2.23％和0.27％，其中16个处于桂花本地品种。局部变种DP7，DP8，DP40，DP77中发现了一个B染色体的细胞，两个B染色体的细胞。们可以看到桂花的B染色体具有与其他生物的B染色体相似的形态特征。
　　是近端着丝粒染色体，平均长度为2.56μm，比第10个常染色体稍短（表2）。B染色体主要为点状，少数为杆状，在中部有丝分裂的图像上，可以看到杆中的B染色体具有明显的着丝点，并以姐妹染色单体的形式存在。度染色，没有明显的着丝粒（图1）。析了无B染色体和B染色体的桂花10个常染色体核型的主要参数。表3所示，分析了没有B染色体的桂花品种的1至10号染色体的绝对长度。6.50、5.74、5.28、4.95、4.69、4.33、4.09、3.75、3.47、3.17μm，带有B染色体的材料染色体的绝对长度1至10是6.10、5.39、5.01、4.78、4.50、4.19、3.93、3.68、3.46、3.17μm。有B染色体的轻度桂花本地品种的1至10号染色体的绝对长度在4.79至7.72、4.53至7.43、4.25至6.61、4.11至5之间变化98、3.86至5.34、3.63至5.16、3.37至4.95、3.01至4.53、2.50〜4.88、2.33〜4.93μm ，桂花B染色体的1-10号染色体的绝对长度范围为4.83〜8.49，4.24〜7.69，3.87〜6.41，3.64〜6 ，33，3.53〜5.90，3.15〜5.69，2.96至5.57，2.67至5.17，2.48至5.08，2.18至4.85微米。有B染色体和B染色体的轻度桂花本地品种的1至10号染色体的相对长度分别为14％，12％，11％，11％，10％，9％，9％，8％，8％， 7％。有B染色体的桂花1-10号染色体的相对长度变化为12％-17％，11％-15％，10％-14％，10％-12％，9％-12％，8 ％到10％，8％到10％，7％到9％，6％到9％，6％到8％。有桂香B的桂花本地品种的1号到10号染色体长度的相对变化为13％。〜15％，11％〜13％，10％〜12％，10％〜11％，9％〜11％，9％〜10％，8％〜9％，7％〜8％，6％〜8 ％，桂花树价格6％到8％。有B染色体和B染色体的轻度桂花本地品种的1至10号染色体的平均臂比在1.23和1.57之间，它们都是中心着丝粒染色体。t检验是在34个不含B染色体的桂花品种和16个具有B染色体的桂花品种中的1至10号染色体的相对长度上进行的。表4所示，t值的绝对值10对染色体中的全部都是中等的。

　　于2，测试结果不显着，表明B染色体的存在对常染色体的相对长度没有显着影响。花B染色体是近端着丝粒染色体，平均长度为2.56μm，比第10个常染色体染色体短。10。大多数B染色体生物中，B染色体的数量趋于不稳定并表现出多样性[11]。胞有丝分裂过程中B染色体的异常分布导致B染色体的异常传播，从而导致不同个体与同一物种的不同组织器官之间的B染色体数目发生变化[12]。
　　这项研究中，桂花中的B染色体数目在0和2之间。金凤等人发现蒙古草的减数分裂阶段B染色体数目在1和4之间，并且B染色体可以配对[13]。华等。经分析了白花丹属虎眼的染色体，表明白花丹属的体细胞染色体包含18个稳定的A染色体和28至36个不同的B染色体[14]。Stark等报道，桂花中的B染色体数目在1至5之间[15]。等。究了桂花近交系B染色体的序列，发现近交系L289有2、4、6 B条染色体，近交系W22有4、10、14、16 B染色体[16]。本研究中，桂花品种的B染色体中，短杆状的B染色体具有明显的着丝粒和姐妹染色单体，而点状的B染色体则被高度染色，没有着丝粒和姐妹没有明显的着色。体。杆状染色体B可以进行正常的有丝分裂，而点状染色体B不能进行正常的有丝分裂。可能是由于B染色体无法执行正常的有丝分裂所致，这是不同细胞中数目不同的原因之一。花品种的体细胞中含有高频B染色体，这可能与自然授粉形成的桂花品种的复杂遗传基础有关。B染色体的存在对物种的重要性以及B染色体的存在是否对物种有影响的问题一直是学术界争论的话题。常，认为B染色体的存在对物种的影响通常是中性的。

　　而，从生物世界中B染色体的广泛分布以及在许多特定环境中的存在来看，我们发现当B染色体以一定频率出现时，它们可以显着提高个体的适应性[18] 。黑麦草中，如果植物处于从播种到生长的高密度状态，则部分植物将被淘汰，最后的幸存者通常仅限于含有B染色体的植物。些严重的情况在选择压力下，具有B染色体的植物具有更大的竞争力和适应性[19]。型的特征是鉴定植物的重要指标，关于桂花A和B的染色体染色体核型的研究很少。研究结果表明，本地品种的核型1至10 B染色体的桂花的绝对长度和相对长度变化范围很广，平均绝对长度，相对长度和臂长比没有显着差异。
　　型影响很小。类似于蔡华等人的分析结果。眼白粉虱的染色体核型[14]。们认为B染色体的存在对A染色体的核型没有显着影响。B染色体存在的情况下，桂花的常染色体可以根据其自身的遗传机制正常分裂，而不会不受染色体B的影响。色体B的遗传机制可能与正常染色体不同。B染色体的遗传机制及其对单个生物的生长和发育的影响需要进一步研究。
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