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桂花种子纯度的SSR分子标记检测研究报告

2020-01-16 06:22:57

  摘要:在本实验中,使用SSR分子标记法测试了桂花锦清707和石滨338桂花的种子纯度。果表明:可以使用8对SSR引物bnlg1940k7,phi053k2,bnlg2291k4,umc1705w1,bnlg2305k4,bnlg1702k1,phi080k15和umc1492y13来鉴定晋清707种子的纯度,鉴定Shibin 338种子的纯度。用引物phi053k2,金清707种子的纯度为92%,使用引物bnlg1702k1,Shibin 338种子的纯度为66%,无其中两个不符合国家标准。研究从20对桂花的基本SSR引物中选择了8个多态性引物。
  们可用于金清707和世宾338种子的纯度测试,大大缩短了种子纯度的测试周期。花是中国重要的粮食作物,也是动物饲料加工的重要来源,在中国农业生产中占有非常重要的地位[1]。子是农业生产中最基本的生产手段。子的质量决定了作物的数量和质量。子的纯度是显示种子质量的重要因素[2]。子纯度的检测是充分利用农作物产量潜力并保证农作物质量的必要措施。据以前的研究,种子纯度降低1个百分点将直接使作物单产降低约1%[3]。子市场的不规则性已经严重危害了育种者,生产者和发行者的利益。
  疆是中国的一个农业大省,种子市场的混乱和混乱严重损害了育种者,生产者和发行者的利益,因此鉴定种子纯度非常必要。定种子纯度的方法主要包括田间形态鉴定,生化标记物鉴定和分子DNA标记物鉴定[4]。领域的初始形态学识别存在诸如识别周期长,对环境的影响大和准确性差等缺点[5];生化标记的鉴定使用不同种类的蛋白质进行鉴定,蛋白质的电泳鉴定易受环境和生长条件的影响。杰辉[6],张成义[7]等人已经使用生化标记物鉴定方法快速准确地分离了不同品种。比之下,SSR标记具有多态性高,共显性强和易于使用的优势[8]。Liu Hongkui [10],Li Yang [11]等人使用多态性SSR引物分析了桂花种子的纯度和指纹图谱。Wu Mingsheng [12]等人使用SSR标记来测试辣椒种子的纯度。试桂花种子的纯度对于监测桂花种子市场和保护生产者和经营者的利益是有益的。本研究中,使用20种桂花SSR引物筛选特异性引物,以鉴定两种品种的桂花金清707和世宾338的纯度。用特定引物鉴定纯度样品取自Jinqing 707和Shibin338。试材料:杂种Jinqing 707及其亲本种子Shibin 338及其亲本,数据库中有20对SSR引物序列(https:// www。maizegdb.org/)。剂:氯仿,SDS提取物,异丙醇,桂花树价格5 mol / L氯化钠溶液,β-巯基乙醇,70%乙醇,TE缓冲液,ddH2O,10×缓冲液,MgCl2,dNTP,Taq酶,伯,95%乙醇。照郭敬伦等的方法。[13],提取桂花DNA并从每种种子中随机选择50个种子从种子的胚中提取DNA。京六合华大基因技术有限公司选择合成了二十对在桂皮技术规格书NY / T 2475-2013中发布的SSR桂花引物。亲本基因组DNA Jinqing 707和Shibin 338为模型,在8%非变性聚丙烯酰胺凝胶上进行PCR扩增和电泳后,选择了20对SSR引物作为多态性引物,可以清楚地区分亲本。PCR反应系统:10×PCR缓冲液2μL,2.5 mM dNTP 1.2μL,上,下游引物10μM各自0.25μL,5 U /μLTNDNA聚合酶0.2μL,模板DNA 2μL无菌水高达20μL。SSR扩增程序为:在94℃预变性4 min,在94℃变性45 s,在引物退火温度下退火45 s,延伸到72℃45 s,总共35个循环;延伸至72℃10分钟,PCR产物在4℃保存。应程序的反应时间,温度和频率可以根据不同的PCR仪器,酶和引物进行相应调整。过在8%非变性聚丙烯酰胺凝胶上的电泳(150V 60-80分钟)分离扩增的产物,用银染色并观察。
  测试样品和对照样品(父母和父母)在同一电泳板上并排通过时,成对比较测试样品和对照样品,相似性并标出每个站点的差异。用SSR引物扩增Jinqing 707和Shibin 338的亲本DNA。果分别如图1和2所示。金青707亲本中有8对SSR引物,其扩增产物之间存在明显差异,其中有8对SSR引物:umc2105k3,bnlg2291k4,umc1705w1,bnlg161k8,bnlg1702k1,umc1545y2,phi080k15和umc14。庆707种子纯度的鉴定在鉴定金庆707种子纯度的8对引物中,phi053k2引物用于扩增金庆707及其亲本基因。707种子样品的纯度结果如图3所示。测试样品的种子类型有三种:杂交种子金清707,雄性近交系种子和雌性近交系种子。据该公式,该批次的锦清707种子的纯度为92%,包括4%的自交雄性杂种和4%的自交雌性杂种。引物bnlg1702k1扩增Shibin 338及其亲本的DNA,并测试一批Shibin 338种子样品的种子纯度。子和母系母本的种子。
  计算,这批Shibin 338的种子纯度为66%,其中包含34%的雌性自交系杂种。研究从20对桂花SSR引物中选择了多态性引物,对晋清707和石滨3 382个品种的种子纯度进行了检测。钦宏[14],卢宏[15],李如玉等[16]使用SSR分子标记研究棉花,油菜籽和桂花等农作物种子的纯度,所得结果与传统田间鉴定相符。量先前实验与本实验结果的结合表明,SSR分子标记方法在鉴定桂花和其他培养物种子的纯度方面可获得良好的结果。本实验中,使用SSR分子标记鉴定了两个桂花金清707和世宾338杂种的种子纯度,其中金清707桂花杂交种的种子纯度为92%,种子纯度Shibin 338桂花杂交样品中的66%,均未达到桂花单作田间种子96.0%的种子质量标准要求。

桂花种子纯度的SSR分子标记检测研究报告_no.672

  
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