儋州桂花树价格

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　　桂花是世界三大粮食作物之一,我国是桂花生产大国,2012年我国桂花总产量首次超过水稻,成为第一大粮食作物。杂交桂花种子的纯度严重影响着作物的产量和品质,同时也是种子生产和质量管理中最棘手的问题。因此,快速、准确、有效鉴定桂花杂交种的纯度和真实性是十分必要的。传统的桂花种子纯度检测方法有形态鉴定法、幼苗鉴定法、田间小区种植鉴定法等,但存在周期长,易受环境影响、准确性差等不足之处。此外,我国生产使用的桂花自交系主要是塘四平头、旅大红骨、兰卡斯特和瑞德,遗传基础相对狭窄,因此以传统的形态标记鉴别品种日趋困难。随着分子生物学的发展,RFLP、RAPD、AFLP、SSR等分子水平上的技术日趋成熟。其中,SSR标记被广泛应用于农作物遗传、育种种群鉴定、种子纯度检验等研究中。SSR具有快速、准确、信息含量高、呈共显性分离、易于分析、重复可靠等优点,在桂花指纹图谱构建、品种真实性鉴定以及纯度检验方面具有明显优势,并成功商业化。桂花杂交种新科910由河南省新乡市农业科学院选育,2014年5月通过河北省品种审定委员会审定,审定编号为冀审玉。
　　1、儋州桂花树价格:为了快速有效地鉴定市场上新科910种子的真伪和纯度
　　为快速有效鉴定市场流通的新科910种子的真实性和纯度,笔者利用SSR分子标记技术,用60对引物(包括40对核心引物)对新科910及其亲本进行SSR-DNA指纹图谱分析,并将其数字化,计算出现相同指纹图谱的概率,从而筛选出能有效鉴定新科910纯度的引物,以期更准确鉴定和保护该品种提供参考依据。试验材料和主要试剂杂交种新科910及其父本H865和母本K381均由河南省新乡市农业科学院桂花课题提供;试验所用60对SSR引物序列信息来自桂花基因组数据库,并由上海生物工程股份有限公司合成;试验所用DNA聚合酶、dNTP购买于宝生物生物工程(大连)有限公司。DNA提取。用于构建指纹图谱DNA提取方法。将新科910及其亲本的桂花种子沙培,于30℃光照培养箱中暗培养,待桂花苗长至3叶1心,取叶片混样,用CTAB方法提取总DNA。紫外分光光度计检测DNA的质量和浓度,加水稀释至25ng/μL,-20℃保存备用。检测纯度用DNA提取。取新科910种子100粒(其中有3粒是人为加入的母本种子)沙培,于30℃光照培养箱中暗培养,待桂花苗长至3叶1心时,用CTAB方法提取单株DNA,-20℃保存备用。PCR扩增体系总体积为15μL,其中dNTPs0.2mmol/L,引物0.25μmol/L和模板DNA25ng,加灭菌纯水补足体积。扩增程序为:94℃预变性5min,94℃40s,60℃35s,72℃45s,桂花树价格35个循环,72℃延伸10min。PCR扩增反应在BIOERTC-96/G/H型PCR仪上进行。扩增产物加入适量上样缓冲液6×LoadingBuffer混匀后,各取3.5μL在8.0%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,银染显色。然后在胶片观测灯上观察电泳结果,采用凝胶成像系统扫描图片或者用相机拍照保存图片。

筛选SSR产物带型稳定且清晰的引物,构建新科910的指纹图谱。并以1、0统计建立数据库,将新科910指纹图谱数字化。在相同迁移位置(分子量相同片段)有带记为1,无带记为0。根据公式P=1/2n计算相同指纹图谱有可能出现的概率,式中2为相同迁移率位点上等位基因存在的"有"或"无"2种关系;n为等位基因的数目;2n为检测n个等位基因时有可能涉及的所有自交系的个数。
　　2、儋州桂花树价格:验证了纯度鉴定的可行性
　　根据构建新科910的指纹图谱,筛选出可用作纯度鉴定的引物,再从中任选1对,用来验证其鉴定纯度的可行性。根据公式:种子纯度=×100%,计算样本种子纯度。
　　3、儋州桂花树价格:从60对用于扩增新科910及其亲本的引物中
　　从60对用于扩增新科910及其父母本的引物中,筛选出带型稳定清晰、重复性好的引物15对,用于构建新科910的指纹图谱。这15对引物分布于桂花的9条染色体上,共检测出51个等位基因,每对引物可检测出2～6个等位基因,平均3.4个,片段大小为100～400bp(表。指纹图谱构建筛选出的可用于构建新科910指纹图谱的15对引物分别是phi96100y1、umc2105k3、bnlg2291k4、umc1705w1、bnlg2305k4、bnlg161k8、phi299852y2、umc2160k3、umc1125y3、bnlg240k1、umc2084w2、umc1231k4、phi041y6、umc1432y6、umc2163w3,其扩增的主条带为100～400bp。这15对引物扩出的新科910的主条带均是父本和母本主条带的叠加,这很好地印证了SSR分子标记共显性的遗传特点。部分引物扩增结果如图1。可用作纯度检测引物有6对,分别是umc1705w1、bnlg2305k4、umc1432y6、umc2084w2、phi041y6、umc2163w3。其中,引物umc1705w1、bnlg2305k4、umc1432y6扩增条带为200～300bp,条带清晰,片段大小差距较大,可用作新科910纯度鉴定;引物umc2084w2扩增条带为100～200bp,条带清晰,片段大小差距较大,且父母本均只有1条条带,可用作新科910bp纯度鉴定;phi041y6和umc2163w3扩出的条带为200～400bp,条带清晰稳定,片段大小差距较大,且父母本均只有1条主条带,可用作新科910纯度鉴定。将15对引物扩出的片段数字化,分别用1和0表示,由表2可知,新科910及其父母本均由顺序不同的51位数字组成。以父本H865为例,出现与其完全相同数字顺序的概率大约为4.44×10-16,即在大约2.252×1015份材料中只有1份材料与其指纹号码相同,概率极低。
　　4、儋州桂花树价格:因此可以推断这个数字指纹是唯一的
　　所以可以推断这个数字指纹图谱是其特有的。同理,新科910及其母本的数字指纹也是特有的,再一次证明了这15对引物可用于新科910及其父母本真实性鉴定。从6对可用于纯度鉴定的引物中任选1对鉴定新科910的纯度,结果见图2。由图2可知,第26泳道条带与母本一致,应该是人为加入的母本种子,这与100粒新科910种子中有3粒人为混入的母本种子的结果基本相符,说明这些引物对新科910纯度鉴定结果较可信。该研究用分布于桂花10条染色体上的60对引物(包括40对核心引物)对桂花杂交种新科910及其父母本进行SSR分析,筛选出15对引物可用来构建新科910及其父母本的指纹图谱,并将指纹图谱数字化,计算出出现相同指纹图谱的概率为4.44×10-16,概率极低,可以说这15对引物所构建的新科910及其父母本的指纹图谱是特有的,这为杂交种新科910的真实性鉴定提供了参考。该研究从15对用于构建新科910指纹图谱的引物中,选出6对用于新科910的纯度鉴定。这6对引物所扩出的条带在100～400bp,在农业部提供的参考标准之内;且条带清晰稳定,片段大小差异较大,适合用作新科910种子纯度鉴定。从这6对引物中随机挑选1对,用来验证其可行性,结果与预期结果相符,证明其可用来鉴定新科910纯度。SSR标记操作相对简单,可重复性强,可供选择的标记较多,且该技术已相当成熟,被广泛应用在遗传多型性分析、遗传图谱构建、自交系系谱研究、杂交优势群和DNA指纹图谱建立上。该研究利用SSR标记所构建的新科910指纹图谱及纯度鉴定,可操作性强,可适当应用到生产上。
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