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桂花百科

广西桂花绿斑驳花叶病毒感染南瓜的分子鉴定

2019-12-27 06:22:12

  在广西南宁郊区的一个温室中,从瓢虫(Lagenaria siceraria(Molina))中采集了显示绿色静脉和花叶症状的病毒样本。ELISA测试表明样品与绿色黄瓜斑驳病毒(绿色黄瓜斑驳)有关。叶病毒(CGMMV)具有密切的血清学关系,使用RT-PCR方法从样品中扩增出约500 bp的DNA片段,序列分析表明该片段为该病毒分离株被暂时命名为GX-BG。膜蛋白基因核苷酸序列的系统树分析表明,报道的CGMMV主要分为3类,GX-BG和辽宁分离株(CGMMV-LN)属于分别到不同的群体。英国的桂花上首次发现并报告了桂花绿斑花叶病毒(CGMMV),主要分布在欧洲,印度,日本和其他地方的葫芦科植物上。
  某些国家和地区使用会造成严重损坏。2005年,秦碧霞等人首次报道CGMMV感染了中国广西的观赏南瓜。文报道了广西南瓜感染的CGMMV分离株的分子鉴定及其毛蛋白基因的序列分析。广西南宁郊区的大棚中采集了带有绿色静脉和花叶症状的南瓜叶。赠了西瓜花叶病毒(WMV),西葫芦花叶病毒(ZYMV)和桂花花叶病毒(cu-cumber)花叶病毒抗血清(CMV)中国农业科学院病毒与生物技术研究所,中国农业科学院石油研究所,Piero Roggero博士(意大利应用研究中心,Fitovirologia应用研究所);南瓜花叶病毒(南瓜花叶病毒(SqMV)和CGMMV抗血清购自美国的Agdia,山羊抗兔IgG-AP和IgG -AP山羊抗小鼠购自华美生物工程公司; Trizol是北京Bodatek生物基因技术有限公司的产品。aq聚合酶,逆转录酶AMV,RNasin,dNTP等间接ELISA(DAC-ELISA)用于检测WMV,ZYMV,CMV,SqMV和CGM-MV,按照手册d提取总RNA。照Trizol试剂的说明操作,将RNA溶于30μlDEPC水中以备后用,以oligo(dT)为引物,以总RNA为模板,通过cDNA合成cDNA。转录:基于蛋白质基因序列设计了PCR特异性引物。告的CGMMV包膜e:直接引物Pf:5-ATGGCTTACAATCCGATCAC-3,反向引物Pr:5-CTAAGCTTTCGAGGTGGTAGC-3,扩增了约500 bp。PCR反应体系为20μL,扩增条件参见Chen Hongyun等。过1%琼脂糖电泳检测PCR产物。
  PCR产物(GX-BG)直接送到上海英骏生物技术有限公司。于克隆和测序。用Vector NTI套件和DNAMAN软件进行序列比较和系统进化树分析。于序列分析的包膜蛋白基因分别来自广西分离株。

广西桂花绿斑驳花叶病毒感染南瓜的分子鉴定_no.559

  (GX-G,DQ647384; GX-BG),辽宁分离株(LN,DQ217778),桂花树价格日本分离株(W,AB015146; SH,D12505),巴基斯坦分离株(PK,AB127937),印度尼西亚分离株(ID,AB194531) ),韩国分离株(Kw,AF225984; KW,AF417242; KOM,AF417243; NS,AJ243831; Y,AJ245440),法国分离株(Fr,AJ429090),希腊分离株(GR3,AJ459421; GR5,AJ459422; GR7,AJ459423)和印度分离株(BT,AY309021)。DAC-ELISA测试表明,古德病样品与CGMMV抗血清呈阳性反应,与WMV,ZYMV,CMV和SqMV抗血清呈阴性反应。用CGMMVcP基因引物,从南瓜病叶的总RNA中扩增出约500 bp的特定片段,这与预期片段大小一致,但是健康南瓜的叶子中没有健康碎片(图1)。列分析表明,GX-BG CP声学基因由486个碱基组成,编码161个氨基酸,与报道的其他CGMMV分离株相同。GX-BG与其他16个分离株的cp基因的核苷酸序列具有90%以上的同源性,与GR5的同源性最低(91.2%),与LN和L5的同源性为98.1%。GX-G cp基因的核苷酸序列完全相同。声音基因cp核苷酸序列的系统树的分析表明(图2),这些分离株分为与进化相关的3个种群,广西分离株(GX-BG和GX-G)和l ,印度(BT),希腊(分离GR7),日语(W),法语(Fr),巴基斯坦(PK)形成了一个与W和Fr密切相关的簇,其序列同源性为99.4 %;来自辽宁(LN)和印度尼西亚(ID),日本(SH),韩国(KW,NS,Y,KOM,KW)的分离株演变成另一类群,而两个希腊分离株(GR3)和GR5)独立形成一个集群。GX-BG与其他16个分离株的氨基酸序列cp有98%以上的同源性,其中98.8%与GR7,Y,99.4%与PK,GR3,GR5同源,其余11个分离株的cp氨基酸序列相同。

广西桂花绿斑驳花叶病毒感染南瓜的分子鉴定_no.49

  ELISA检测和序列分析结果表明,感染广西南宁温室南瓜的引起绿色脉络和花叶症状的病原体是花叶病毒。桂花块(CGMMV)。项研究进一步证实了广西CGMMV在分子水平上存在葫芦科。进化关系中,分离株GX-BG和GX-G,BT,GR7,W,Fr,PK形成一个簇群,该簇群与cp GX-G基因的核苷酸序列完全一致,并且与W和Fr等在中国,它不是具有LN分离株的集群,这可能与分离株和不同种子来源的地理分布有关。GX-BG与GX-G,LN,W,SH,K-W,KOM,NS,Y,Fr,GR7和BT具有完全相同的cp氨基酸序列,并且它们可能有共同的起源。CGMMV是影响葫芦科植物的重要病毒之一,对生产有重要影响,容易通过树液的摩擦而传播,其中有毒种子和植物的运输是主要的传播途径。距离。2006年,中国农业部(农业部广告第788号)将该病毒确定为国家农业植物检疫品种。病毒已在中国台湾,广西,辽宁和其他地方报道,但目前仅在本地传播。府,检疫和植物保护服务部门应高度重视及时有效的措施,从源头上控制该病毒,以防止其传播并确保中国葫芦类作物的安全生产。
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