桂花树价格(加工桂花无离层突变及离区JOINTLESS基因序列分析)

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目录：
1、无离层桂花品种不仅可以改善桂花生长过程中外界环境引起的落花落果情况
2、桂花离区发育控制基因J是MADS-box基因家族的一员
3、PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测
4、JOINTLESScDNA序列比对分析经DNAMAN5.0软件分析
5、由图10可见
6、Mao等也在桂花自然突变体j中发现
　　加工桂花是普通桂花的一个栽培种。

随着桂花加工产业的兴起和快速发展,作为专门用于加工的桂花品种,以其果皮厚、耐储运、桂花红素含量高以及矮化自封顶、免去整枝搭架的麻烦等特点而越来越受到人们的重视。

桂花的落花落果特性严重影响桂花的产量。

　　

无离层桂花品种不仅可以改善桂花生长过程中外界环境引起的落花落果情况

　　研究发现,基因序列加工分析JOINTLESS基因序列加工分析无离层桂花品种不仅可以改善桂花生长过程中外界环境引起的落花落果情况,保证桂花产量;而且可以提高机械收获和后续加工效率,同时,可以减少运输过程中果柄对果实造成的机械损伤,对提高果实品质也具有一定的意义。

目前,对桂花花梗离区的研究已成为热点,并取得重要突破。

　　

桂花离区发育控制基因J是MADS-box基因家族的一员

　　桂花离区发育控制基因J是MADS-box基因家族的一员,它的突变会引起桂花果柄或花柄离区的消失。

1994年Wing等报道,通过构建遗传和物理图谱,以TG523作探针,加工桂花无离层突变桂花树价格用Southen杂交,将J定位在桂花细菌人工染色体TY142不足50kb的片段内,并报道首次分离了与离区发育直接相关的基因J。

通过重组与反义抑制试验,肯定J是一个新的LeMADs-box基因,转录物表达的时空模式显示,J在花柄离区发育中的特异性是转录后水平上调节的,转基因互补试验证实桂花果实离区正是由这个基因控制的。

本试验通过对加工桂花无离层突变的原因及加工桂花中JOINTLESS基因序列进行分析,从分子水平阐述无离层突变发生的原因,以期为无离层加工桂花品种的选育及应用奠定理论基础。植物材料试验于2012年秋季在东北农业大学园艺站进行,有离层加工桂花品种09872和无离层加工桂花品种08003均由东北农业大学桂花课题组提供,并于日光温室内进行正常栽培管理。选取桂花植株幼嫩叶片,装入1.5mL离心管内,加工分析序列加工分析投入液氮中冷冻5min,于-80℃超低温冰箱中保存备用。根据NCBI基因序列AF275345,用Primer5.0软件设计引物F:5-ATAGGGTAGAGAGGTTTTTTCC-3,R:5-CGTAGGCTAAAAGGCGTAG-3。PCR反应体系为buffer5μL、2.5mmol/LdNTP4μL、引物R2μL、引物F2μL、模板DNA1μL、5U/μLTaq1μL、ddH2O35μL。反应条件为:94℃5min;94℃1min,55℃30s,72℃5min,桂花树价格40个循环;72℃延伸10min。
　　

PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测

　　PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测,经生工生物工程(上海)股份有限公司DNA快速纯化/回收试剂盒回收纯化目的片段,并按原体系进行二次扩增;将二次扩增的产物与pMD18-TVector载体重组连接,转化大肠杆菌感受态细胞,离JOINTLESS基因序列加工分析并选择阳性克隆送生物工程(上海)股份有限公司测序。花梗部JOINTLESS基因cDNA克隆取有离层品种09872植株幼嫩的花梗区,采用Trizol法(北京康为世纪生物科技有限公司)提取总RNA,逆转录合成cDNA,根据NCBI基因序列AF275345,用Primer5.0软件设计引物F:5-TCCCTCTTTCTTCAACTCTC-3,R:5-ATCTCATGTATTCGTCCCATAG-3。PCR获得JOINTLESScDNA片段,PCR反应体系为buffer5μL、2.5mmol/LdNTP4μL、引物R2μL、引物F2μL、模板DNA1μL、5U/μLTaq1μL、ddH2O35μL。反应条件为:94℃5min;94℃1min,55℃30s,72℃5min,35个循环;72℃延伸10min。cDNA片段回收扩增,T载体连接、阳性克隆筛选并测序。生物信息学分析测序结果利用NCBI数据库Blast软件进行比对分析,利用DNAMAN5.0软件进行同源性及蛋白相似性分析,采用NCBI的ProteinConservationDomain程序分析蛋白质氨基酸结构。采用Protscale工具对JOINTLESS编码的蛋白质产物疏水性和亲水性进行分析,使用Sopma分析JOINTLESS编码蛋白质产物的二级结构,利用Phyre对加工桂花JOINTLESS基因编码的蛋白质产物进行三级结构预测,使用DNAMAN5.0软件对JOINTLESS基因编码产物进行系统发育分析。本试验采用CTAB法提取有离层品种09874与无离层品种08003的基因组DNA,用同一对引物对基因片段进行PCR扩增。由图1、图2可见,所得DNA片段长度相差1000bp左右。可见,及JOINTLESS基因序列加工分析加工桂花无离层突变无离层品种在此段内必有一段基因缺失,其缺失片段的长度为1000bp左右。测序获得加工桂花有离层品种的JOINTLESS基因片段序列长为1286bp,无离层品种的突变序列只有347bp,这2个序列经Blast比对发现,无离层品种的JOINTLESS基因从第150位到第1089位共939bp的碱基发生缺失(图。将JOINTLESS基因与其cDNA序列比对发现,JOINTLESS基因的起始密码子位于JOINTLESS基因的第816位碱基(图,而这一表达起始位置恰好位于无离层品种缺失的部分。因此,加工桂花无离层品种的突变,是由JOINTLESS基因第1个外显子的部分序列连同起始密码子上游共939bp的碱基缺失所引起的。
　　

JOINTLESScDNA序列比对分析经DNAMAN5.0软件分析

　　JOINTLESScDNA序列比对分析经DNAMAN5.0软件分析,测序得出的加工桂花JOINTLESS基因cDNA序列与GenBank提交的cDNA序列的同源性高达99.75(图,蛋白序列相似性为97.75。加工桂花JOINTLESS基因共编码265个氨基酸,其cDNA序列并没有发生插入与缺失,只是个别碱基发生突变,这些突变并没有使其保守结构域发生变化。加工桂花JOINTLESS基因编码蛋白质的结构分析通过NCBI的ProteinConservationDomain程序对加工桂花JOINTLESS全长cDNA序列编码的265个氨基酸序列进行结构分析,结果表明,加工桂花JOINTLESS基因编码产物属于MADS基因家族type类型中的一员(图,其蛋白分子质量为30.43ku,等电点为7.38794。JOINTLESS编码蛋白质的疏水性和亲水性分析用Protscale工具对加工桂花JOINTLESS基因编码的蛋白质产物疏水性和亲水性进行分析,依据氨基酸分值越低亲水性越强、分值越高疏水性越强的规律,由图7可以看出,整个蛋白质中疏水性最大值是2.144,最小值为-3.200,区JOINTLESS基因序列加工分析在整个肽链中亲水性氨基酸大量分布其中,整体表现为亲水性。JOINTLESS编码蛋白质的二级结构分析用Sopma对JOINTLESS编码蛋白质产物的二级结构进行分析,结果表明,JOINTLESS的二级结构中53.21%为α螺旋结构,32.83%为不规则卷曲结构,10.19%为β折叠结构,3.77%为β转角结构(图。JOINTLESS编码蛋白质产物的三级结构分析利用Phyre的三级结构预测功能对加工桂花JOINTLESS基因编码的蛋白质产物进行三级结构预测,并利用Rasmol软件对三级结构图形化分析。由图9可见,JOINTLESS的蛋白质产物含有50个氢键,3个α螺旋结构,2个β折叠结构和8个转角结构。
　　

由图10可见

　　由图10可见,加工桂花JOINTLESS基因与矮牵牛中该基因序列相似性最高,与葡萄物种的相似性最低。对加工桂花无离层品种的jointless突变分析可知,突变是由JOINTLESS基因第1个外显子的部分序列连同起始密码子上游共939bp的碱基缺失所引起的,这个片段的缺失会直接导致其丢失启动子区域的转录因子结合位点,同时丧失转录功能从而不能形成功能蛋白。
　　

Mao等也在桂花自然突变体j中发现

　　Mao等也在桂花自然突变体j中发现,由于启动子区段的一段DNA缺失引起J转录发生变化,导致翻译的蛋白失去功能,最终使桂花的花柄离区发育受到影响,不能形成正常的离区。植物MADS-box基因对植物基因的调控中,大多数以形成复合体来调控基因的转录与表达,筛选与J互作的蛋白,序列加工分析基因序列加工分析同时,JOINTLESS作为调控因子,其功能并不是单一控制离区的发育和形成。在桂花中J对于花序分生组织特异性和每个花序分生组织花原基的保守性是必需的,这一新功能的发现也许会为进一步研究J甚至是整个MADS-box基因家族调控花的发育机制提供新的思路。另外,对加工桂花有离层品种JOINTLESS基因的cDNA序列分析可知,与普通栽培品种相比,加工桂花JOINTLESS基因的保守结构域并没有发生变化,而且基因序列也没有发生插入与缺失,只是2个碱基不同,这可能是同物种不同品种间特有的差异所导致,但也不排除在PCR扩增时碱基发生错配的可能。总之,加工桂花的JOINTLESS基因编码序列与普通栽培桂花品种的相比,发生2个碱基的突变,而jointless突变则是由JOINTLESS基因第1个外显子的部分序列连同起始密码子上游共939bp的碱基缺失所引起;JONINTLESS基因共编码265个氨基酸,预测所得的蛋白质整体表现为亲水性;经系统发育分析得出,加工桂花JOINTLESS基因序列与矮牵牛中该基因序列相似性最高,与葡萄物种的相似性最低。